Com um novo vírus desenvolvido, seu criador, o cientista William Birkin, tenta fugir para que seu G-Virus não seja usado da mesma forma que a versão anterior - o T-virus - pela Umbrella Corporation. A empresa manda seu grupo de ataque com o intuito de recuperar seu investimento. A equipe de ataque chega no laboratório de Birkin abaixo de Raccoon e tomam à força o G-Vírus do cientista. William, mortalmente ferido, não permitiria tal ato, e injeta em si mesmo o G. Como na teoria, os efeitos do G-Vírus são devastadores, e William sofre uma abominável mutação, e persegue e mata os agentes que roubaram sua criação. No ataque, diversos frascos são quebrados nos esgotos, e os ratos consomem os líquidos infectados. A maior parte da população da cidade se transforma em zumbis em questão de horas, deixando apenas alguns sobreviventes tentando achar um modo de escapar da cidade com vida.
Ainda na cidade de Raccoon para ver a reação da Umbrella perante as acusações, Jill Valentine estava pronta para encontrar-se com Chris na Europa, mas o T-vírus já havia tomado conta de boa parte da cidade. A moça sai de seu apartamento e tenta fugir da cidade antes que seja tarde demais. Ela conhece o mercenários Carlos Oliveira, Nicholai Ginovaef e o ferido Mikhail Victor, membros de um esquadrão especial destacado pela Umbrella Corporation para salvar os sobreviventes, o que não passa de uma farsa para a multinacional sair isenta de culpa. Outra ação da poderosa empresa envolveu uma B.O.W. altamente poderosa denominada "Nemesis". O "Nemesis" havia sido solto na cidade com a missão de garantir o fim dos últimos membros do S.T.A.R.S. que sobreviveram ao incidente da mansão, pois são os únicos que apresentam risco aos segredos da empresa. Ele consegue persegue e mata um membro dos S.T.A.R.S, Brad Vickers. Inicialmente, Jill não confia muito em Carlos, pois o mesmo servia a Umbrella, mas o jovem revela que não fazia idéia das ações ilegais secretas da Umbrella, e ambos passam a cooperar para sair da cidade. Nicholai, por outro lado, não os acompanha por arrogância, e segue seu caminho independente. Em um dos embates contra Nemesis, Mikhail é morto e Jill é infectada. Carlos a leva para um lugar seguro e pensar no que fazer antes do vírus tomar conta do corpo da ex-S.T.A.R.S.
Leon S. Kennedy, um policial novato aceito pelo R.P.D. inicia seu primeiro dia de trabalho na cidade. Uma dia antes, ao se hospedar em um hotel, Leon dormiu demais e não chegou ao Departamento no horário certo. Um erro que salvou sua vida, deixando Leon longe da cidade enquanto era consumida pelo vírus. Ao dirigir-se para a cidade, a encontra completamente em ruínas e infestada de pessoas semelhantes a zumbis. Paralelamente, a estudante Claire Redfield também chega à cidade, à procura de seu irmão, Chris Redfield, que não deu mais notícias. Tentando fugir dos zumbis, os caminhos de Leon e Claire se cruzam, e ambos formam uma aliança para descobrir o que realmente ocorreu na cidade. Porém, um grande acidente os separa, mas Leon ainda tem tempo de combinar com Claire de se encontrarem no Departamento de Polícia. Em sua rota, Leon conhece Ada Wong, mulher que se apresenta como uma simples civil em busca de seu namorado em meio aquele caos, enquanto Claire encontra a filha de William Birkin, Sherry, perdida e assustada em meio aquele caos. Um fato desconhecido para Leon sobre Ada, era que, ele estava se apaixonando por uma espiã que estava em busca de uma amostra do G-vírus. Um Tyrant fora solto no departamento de polícia, onde Leon, Ada, Claire e Sherry estavam abrigados. O monstro também estava em busca do G-vírus. Ada é ferida em um dos confrontos com a criatura, ela finge-se de morta para não envolver Leon em sua missão. Leon e Claire conseguem, juntos, destruir o laboratório subterrâneo da Umbrella e escapar através da linha de metrô, levando Sherry consigo. Após isso, Claire sabia que deveria continuar sua busca por Chris, e prossegue em sua jornada de busca.
Hunk, agente do time de ataque da Umbrella que foi trucidado por William Birkin, se levanta nos esgotos da cidade dias depois da missão. Hunk foi o único sobrevivente, e ainda estava com uma amostra do G-Vírus em mãos. Sem perder tempo, ele contata seu suporte aéreo e se desloca até um ponto de encontro e é resgatado, entregando o poderoso vírus para a Umbrella.
Um dia depois do ataque do Nemesis que injuriou Jill severamente, Carlos tem acesso ao hospital de Raccoon City e consegue uma vacina para o vírus no corpo de Jill, fazendo-o ficar em estado latente, sem causar danos a ela. De volta às ruas da cidade zumbi, é revelado que o governo pretende bombardear Raccoon City com um míssil nuclear, assim, sendo o único recurso para destruir a infecção viral. Mas Nemesis torna a dificultar as coisas para Jill e Carlos. Naquele mesmo tempo, Ada se levanta e tenta sair o mais rápido possível da cidade, ela estava levando uma amostra do G-vírus. O mercenário Wesker contata a espiã, proponto uma troca: o vírus pelo meio seguro de sair da cidade. Ela logo aceita e vai ao local destinado. O G-vírus agora esta nas mãos de Wesker. Por fim, Nemesis é finalmente destruido e Barry, pilotando um helicóptero, resgata Jill e Carlos. Tudo o que eles tem de fazer agora é sair e assistir à destruição total da cidade de Raccoon, que reduziu-se a um imenso deserto.
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